Эмбрион отстает в развитии на сутки

БИОЛОГИЯ ЭМБРИОНАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ

Болезни эмбрионов возникают вслед­ствие неполноценности яиц или как результат воздействия на процесс инкубации не­благоприятных факторов. Необходимо учитывать запрограммированную патологию яиц, кото­рая обусловлена наличием эндогенных и экзогенных болез­ней у несушек.

Многочисленные патологии эмбрионов подразделяются на эндогенные и экзогенные болезни.

1. Наследственные болезни, вызванные нарушениямив геноме (изменения в оболочках яйца и эмбриона, урод­ства эмбрионов); яйца двухжелтковые, с насечками, с не­правильным расположением воздушной камеры, с явно де­фектной формой, очень мелкие или слишком крупные.

2. Алиментарные болезни: эмбриональные дистрофии – заболевания, связанные с неправильным кормлением несушек; это – гиповитаминозы A, D, Е, группы В и др., недостаточность микро- и макроэлементов и другие причины.

3. Инфекционные болезни, как следствие инфициро­вания яиц в яичнике или яйцеводе: вирусные болезни — НБ, ИЭМ, ИБ, вирусный гепатит утят, вирусный энтерит гусят; бактериальные — сальмонеллез, пуллороз-тиф, респираторный микоплазмоз и хламидиоз.

В экзогенных болезнях выделяют две группы:

1. Болезни «старения» яиц, возникающие при длитель­ном хранении их в неблагоприятных условиях;

2. Болезни, появляющиеся при инфицировании их возбу­дителями через высокопористую тонкую скорлупу, при на­сечках, трещинах, при хранении яиц в условиях повышенной температуры воздуха и низкой влажности, способствующих проникновению извне в яйцо возбудителей аспергиллеза, колибактериоза и др. и смешанной инфекции, вызывающей омфалит. Ветеринарный врач должен уделять серьезное внимание получению полноценного инкубационного яйца, его правиль­ному хранению и соблюдению всех нормативов ветеринарно-санитарных требований при инкубации. Неудовлетворитель­ные результаты инкубации, при которой отмечается низкая выводимость и получают нежизнеспособный молодняк, явля­ются серьезным сигналом к анализу всей технологической цепочки рабочих операций на птицеводческом предприятии. В первую очередь анализируются возрастные признаки раз­вития зародышей сельскохозяйственных птиц

Система наблюдений за эмбриональным развитием заро­дышей в инкубируемом яйце называется биологическим кон­тролем инкубации. Результаты этого контроля обязательно регистрируются в журнале; он включает в себя: овоскопирование яиц на разных днях инкубации, выборочное взвешива­ние их для определения потери массы; выборочное вскрытие яиц с живыми зародышами; учет сроков вылупления и экстерьерно-интерьерная оценка суточного молодняка; патологоанатомический анализ причин гибели эмбрионов; глубокий анализ сложной этиологии возможных болезней в конкрет­ных условиях хозяйства (по записям в журналах, результа­там исследований за предыдущие годы и т. д.)» постановка предварительного диагноза и немедленное, если это возмож­но, купирование болезней эмбрионов до постановки оконча­тельного диагноза. С целью получения дополнительных дан­ных направляют в лабораторию необходимый материал для гистологических исследований, биохимических анализов, мик­робиологических, вирусологических и других исследований.

Эмбриональная смертность. Она неравномерно рас­пределяется по дням инкубации. Регистрируют два подъема смертности: в начале (на 3-5-й день) и в конце инкубации (на 18-19-й день). Хоро­шим считают вывод (80-85%).

При повышенной эмбриональной смертности наблюдают, как правило, три периода гибели эмбрионов: с 1-го по 7-й дни инкубации, с 8-го по 19-й дни и с 20-го дня инкубации. Для патологоанатомического вскрытия достаточно использовать 30-40 погибших эмбрионов в указанные периоды инкубации.

Яйца с зародышами, погибшими до 1-1,5 суток, при овоскопировании часто принимают за неоплодотворенные. С це­лью исключения ошибочного заключения нужно проводить вскрытие таких яиц. В более старшем возрасте у живых эмб­рионов видны кровеносные сосуды эмбриональных оболочек и контуры тела зародыша. У погибших в возрасте 3-7 суток на желтке различают «кровяное кольцо» — посмертное скоп­ление крови в краевых венозных синусах желточного мешка. У эмбрионов, погибших в период 8-10 суток инкубации, сосу­ды, как правило, бескровные. Эту категорию отходов инкуба­ции называют замершими. Погибших на последних стадиях, перед самым вылуплением, называют задохликами.

Эндогенные (наследственные) болезни обусловлены десятками летальных и полулетальных генов, вызываю­щих отклонения в развитии эмбрионов птиц и их гибель. Многие уродства наследуются как рецессивный признак. Но очень часто такие же аномалии могут быть вызваны иными причинами: качеством яиц и условиями инкубации.

К уродствам не всегда ясной этиологии относят: мозго­вые грыжи, полное недоразвитие черепных костей (акрация), недоразвитие или отсутствие глаз (анофтальмия), не­правильное формирование лицевых костей и клюва, недо­развитие клюва, искривление и укорочение конечностей.

Уродствами, имеющими только генетическое происхож­дение, являются: микромелия — короткие ноги при нор­мально развитом туловище; диплодия — частичное удвое­ние костей конечностей; «нога крота» — срастание костей ноги; полидактелия — многопалость; бескрылость, аптери-оз — отсутствие оперения и др.

К уродствам, возникающим на ранних стадиях эмбрио­генеза, относят:

1) двойные уродства — сращенные близнецы и раздво­енные зародыши, с лишним третьим глазом, второй голо­вой; опухоли смешанного строения — тератомы;

2) одиночные уродства, возникающие на более поздних стадиях эмбриогенеза и встречающиеся более часто — все­возможные недоразвития, смещения, искривления и недо­статочность в закладках органов (гипоплазия), пропорцио­нальная или непропорциональная карликовость.

Алиментарные болезни. В основе возникновения этих болезней лежит неполноценность кормления кур родитель­ского стада. К признакам, сигнализирующим о снижении выводимости, относятся: снесение птицей тонкоскорлупных яиц, яиц с бледными слабопигментированными желтками, с плохо выраженной слоистостью белка.

Повышенная эмбриональная смертность в средние сроки инкубации — у кур с 10 по 14 сутки — является симптома­тичным признаком для многих алиментарных болезней. Следует иметь ввиду четыре болезни, обусловленные ис­ключительно неправильным кормлением кур родительского стада: эмбриональная дистрофия, кутикулит, перозис и атак­сия суточных цыплят.

Эмбриональная дистрофия. Эмбрионы отстают в росте и развитии. Замершие эмбрионы в середине срока инкубации (до 20-30% ). Запаздывание с выводом. Большое количество больных с недоразвитым оперением и атаксией.

Патологоанатомические изменения: ноги укорочены, кривые; мышцы атрофированы. Расширенный череп. Уко­роченный клюв. Покровы тела отекшие, большое скопление жидкости в подкожной клетчатке. Печень перерождена (жи­ровая инфильтрация), консистенция плотная, цвет серый или зеленоватый. Почки увеличены, серого цвета, иногда из-под капсулы просматриваются кристаллы солей.

Кутикулит характеризуется недоразвитием, воспале­нием, а часто просто отсутствием микроворсинок. В норме кутикула является защитным барьером, покрывающим эпи­телиальные клетки, выстилающие кишечник, воздухонос­ные мешки, канальцы почек и т. д.

Атаксия суточных цыплят проявляется неспособностью последних к активному движению, что вызвано недоразви­тием полукруглых каналов лабиринта внутреннего уха.

БИОЛОГИЯ ЭМБРИОНАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ

С момента оплодотворения в воронке яйцевода и до снесения яйца в течение 24—27 ч идет усиленное дробление яйцеклетки. На этой стадии несушка сносит яйцо. К этому времени бластодерма состоит из светлого и темного по­лей. Большая часть светлого поля в последующем развитии дает начало эмбриону, а периферический его участок вместе с тем­ным полем является основой формирования временных эмбрио­нальных органов.

В первые часы инкубации завершается стадия гаструляции и происходит активное перемещение и деление клеток образуется полукруглая го­ловная складка — основа головы эмбриона.

Затем в течение 2—3 суток формируются начальные мышечно-скелетные ткани В этот период эмбрион отделяется от желтка: происходит интенсивный рост его спинной части

К 8-жу дню инкубации эмбрион становится похожим па птичий

эмбрион. В последующем происходит дальнейший рост его тела, образование и развитие внутренних органов

Взаимоотношения развивающегося птичьего эмбриона с внеш­ней и внутренней средой яйца обеспечиваются деятельностью временных эмбриональных органов: желточного мешка, амниона, серозной оболочки и аллантоиса. К концу инкубации вре­менные эмбриональные органы исчезают.

Желточный мешок до­стигает наибольшего развития к 11-му дню. Основная функция абсорбция питательных веществ из желтка и перенос их к эмбриону. Питательные вещества желтка усваиваются через желточный мешок при участии протеолитических и липолитических фермен­тов, вырабатываемых тканью желточного мешка. Так же желточный мешок обеспечивает дыхание эмбриона. К концу инкубации желточный мешок вместе с остаточным желтком втягивается в брюшную полость эмбриона. На месте его втягивания образуется пуповина.

Амнион и серозная оболочка образуются к концу вторых су­ток инкубации за счет роста серозно-аммиотических складок. Амнион очень быстро разрастается охватывая зародыш и образуя вокруг него полость.

Се­розная оболочка срастается с амнионом, и к 12-му дню на месте этого сращения образуется серозно-амниотический канал. Амни­он с 8-го дня интенсивно растёт и достигает максимума к 14-му дню. К концу инкубации амниотическая жидкость усваивается эмбрионом, а сам амнион атрофируется и остается в скорлупе. Амниотическая жидкость обладает бактери­цидными свойствами. С 9-го дня инкубации эмбрион начинает заглатывать амниотическую жидкость, а с 12-го дня вместе с ней белок, поступающий через серозно-амниотический канал. При нормальном развитии куриного эмбриона к 16-му дню белок яйца переходит весь в амнион и полностью используется. Запаздывание в усвоении белка через амнион приводит к снижению жизнеспо­собности эмбрионов и качества молодняка.

Аллантоис образуется с 3-го дня. . Рост поверхности аллантоиса заканчивается к 11-му дню инкубации.Он размещен и растет в пространстве между желточным мешком, амнионом и серозой. К 20-му дню аллантоисная жидкость испаряется, а сам аллантоис атрофиру­ется и остается на скорлупе.

Основные функции, выполняемые аллантоисом, — дыхание эмб­риона, накопление и утилизация продуктов распада питательных веществ.

В первые 5 дней инкубации основным источником питания зародыша служат углеводы, окисление которых в первые трое суток инкубации из-за низкого внешнего газообмена и недостат­ка кислорода идет неполно. С 4-х суток углеводы начинают окис­ляться нормально — до СО2 и Н2О. Количество углеводов в яйце быстро уменьшается к 9-му дню инкубации, а в зародыше, на­оборот, увеличивается.

В последующем количество углеводов в содержимом яйца увеличивается за счет распада жира.

Печень эмбриона уже с 8-го дня инкубации способна расщеп­лять жиры до глюкозы, а с активацией инсулина и гликогенсинтетазы в эмбрионе начинает накапливаться гликоген. С накоплением гликогена в печени связан процесс вылупления молодняка: при его недостатке эмбрионы не могут выйти из яйца и часто погибают.

Основной источник энергии для эмбрионов — жир. В начале инку­бационного периода эмбрион усваивает нестойкие ненасыщенные жирные кислоты, а затем в обмен веществ вовлекаются и насы­щенные кислоты.

В желтке содержится до 10% лецитина — наиболее важного энергетического источника для развития эмбриона. В процессе инкубации не весь жир желтка используется эмбрионом, более 30% сохраняется в остаточном желтке у вылупившегося молод­няка. Жир яйца служит также источником воды.

В начале инкубации наибольшее значение имеют минераль­ные вещества белка и желтка, а с 13-х суток — скорлупы. Из белка используется в основном натрий, калий, хлор и сера. Из скорлупы минеральные вещества начинают максимально использоваться со второй половины инкубации — в период быст­рого формирования скелета эмбриона. Скорлупа — основной ис­точник кальция для эмбриона (до 75% его костяка). Кальций скорлупы находится в нерастворимой форме, но под воздействи­ем выделяемого эмбрионом углекислого газа и при наличии во­ды он переходит в растворимую бикарбонатную форму. Важное участие в обмене веществ принимают микроэлементы: марганец, кобальт, медь, цинк, йод, селен и др.

У куриных эмбрионов с 6-го дня инкубации появляются дви­жения тела, а с 8-го дня наблюдаются общие маятникообразные движения всего тела за счет сокращений амниона. К концу ин­кубации двигательная активность несколько снижается, но на стадии вылупления она возрастает, происходит выпячивание шеи в полость воздушной камеры, разрыв клювом подскорлупной оболочки и проклев скорлупы. Уско­рению процесса вылупления способствуют онтимальная темпера­тура, высокая влажность, наличие в воздухе углекислого газа и различных раздражителей (свет, звук, пары формальдегида и др.).

Яйца закладывают в инкубатор, осна­щенный проверенными контрольными приборами. Предпочти­тельно яйца закладывать в одно и то же время суток. Нельзя закладывать холодные яйца.

Контролируют работу инкубаторов ежечасно, записывая в журнал температуру, относительную влажность, положение за­слонок и барабана. Следят за температурой и относительной влажностью в инкубатории. При инкубации яиц уток, гусей и ин­деек выбирают из лотков яйца неоплодотворенные и с погибши­ми зародышами. Эту работу необходимо проводить быстро, не допуская резкого охлаждения яиц. В конце инкубационного пе­риода яйца перекладывают из инкубационных лотков в вывод­ные, укладывая их горизонтально.

Основную выборку молодняка проводят после обсыхания пу­ха. Мо­лодняк выбирают и размещают в ящики, а скорлупу в контейнер.

По окончании вывода выбранный молодняк поступает в специ­альную комнату, выводные лотки — в моечную, а отходы инкуба­ции в контейнерах удаляют из инкубатория.

ОЦЕНКА, СОРТИРОВКА И ТРАНСПОРТИРОВКА МОЛОДНЯКА

Молодняк сельскохозяйственной птицы уже через несколько часов после вылупления приспособлен к самостоятельной жизни, то есть способен передвигаться, клевать и т. д. Принятый в прак­тике термин «суточный молодняк» — условный, поскольку в товар­ной партии он имеет различный возраст — от 1 до 30 ч после вылупления.

Оценку молодняка проводят после его обсыхания и созревания в инкубаторе. В основу определения качества молод­няка положен метод визуальной оценки при внешнем осмотре с учетом его массы, состояния и активности. Масса молодняка — один из основных показателей качественной оценки и в основном зависит от массы используемых яиц на инкубацию и продолжи­тельности срока выдержки молодняка после вылупления.

При передержке суточного молодняка после вылупления мас­са его снижается неравномерно: впервые 24 ч в среднем за каждый час на 0,27%, а после 24 ч потери возрастают до 0,32% в час. При этом некондиционный молодняк теряет в массе в 2 раза больше, чем кондиционный.

При оценке молодняка его делят на 2 категории — кондицион­ный и некондиционный.

Кондиционный молодняк, пригодный к выращиванию, характе­ризуется хорошей подвижностью, быстрой реакцией на внешние раздражители (свет, звук и др.), отсутствием дефектов в экстерь­ере. У него мягкий подобранный живот, полностью втянут оста­точный желток, закрыта и зарубцована пуповина, чистая клоака, хорошая опушенность, пух чистый, блестящий, хорошо пигменти­рован, блестящие глаза, большая широкая голова, корпус плот­ный, упругий киль, ноги и клюв крепкие. Пригодным к выращива­нию считается также молодняк с незначительными отдельными дефектами в экстерьере.

Оценивают молодняк непосредственно при выборке его из ин­кубатора или после непродолжительной просидки в инкубатории. Температура воздуха в помещении, где оценивают молодняк, должна быть в пределах 24—28°С.

Сортируют молодняк по полу в инкубатории. Для определения пола у суточного молодняка предложены различные способы: по цвету пуха, по скорости отрастания перьев на крыле, по развитию рудиментарных половых органов (половых бугорков) в клоаке и с помощью оптического прибора «Чиктестер».

В практике наиболее распространен способ определения пола у суточного молодняка по рудиментарному половому, органу (по­ловому бугорку) у самцов. Определение пола следует проводить как можно раньше — сразу после вылупления молодняка, но не позднее 18 ч, так как позже различия между самцами и самками сглаживаются.

Молодняк берут в левую руку, спиной к ладони и головой к мизинцу, а затем, надавливая на живот большим и указательным пальцами правой руки и освобождая прямую кишку от кала, осто­рожно раскрывают и слегка выворачивают клоаку. У самцов в верхней части клоаки со стороны живота заметен бугорок с була­вочную головку, у самок он отсутствует. Величина и форма поло­вого бугорка могут быть различными — от ярко выраженного крупного до раздвоенного мелкого.

Для транспортировки суточного молодняка используют дере­вянные, фанерные, картонные и пластмассовые ящики, разделен­ные или не разделенные на секции. Емкость ящиков от 60 до 140 суточных цыплят. В боковых стенках ящики имеют отверстия для вентиляции. Размеры ящиков различные, но глубина их должна быть не менее 18 см.

Дно ящиков перед посадкой новой партии молодняка застила­ют бумагой (не глянцевой) или слоем сухих древесных стружек.

При перевозке суточного молодняка температура поддерживается на уровне 24—26°С, влажность— на уровне 60—65%, уровень СО2 должен быть не более 1%. Пе­ред перевозкой и во время ее кормить и поить молодняк не следу­ет. Во время транспортировки суточного молодняка необходимо избегать сильных толчков и тряски.

Биологический контроль в инкубации яиц — комплексная ка­чественная оценка яиц, условий инкубации и суточного молодня­ка. Он направлен на повышение вывода здорового молодняка. Биологический контроль проводят выборочно по всей партии од­нодневного сбора яиц, поступившей из конкретного хозяйства.

Оценка и сортировка поступившей партии яиц от конкретного хозяйства, фермы, птичника производятся одновременно с уклад­кой яиц в лотки. При оценке яиц по внешнему виду учитывают размер и форму яиц, состояние скорлупы. При просвечивании оп­ределяют наличие трещин в скорлупе, состояние воздушной ка­меры, целостность подскорлупных оболочек, градинок, состояние белка и желтка, наличие в яйцах включений.

Основа биологического контроля в процессе инкубации — прижизненная оценка развития зародышей просвечиванием яиц.

Яйца просвечивают в отдельные периоды инкубации с использо­ванием специального устройства — овоскопа. Обычно просматри­вают не всю партию инкубируемых яиц, а пробу из нее, взятую из различных зон инкубатора (верх, низ, середина) в количестве 5—10% от контролируемой партии яиц (3—6 лотков).

При первом просмотре отбирают неоплодотворенные яйца и с погибшими зародышами. Оценку зародыша производят по раз­витию кровеносных сосудов и его положению. В норме просмат­ривается развитая кровеносная система, зародыш не виден: он погружен в желток. На месте зародыша видно просветленное поле, иногда затянутое легкой сеткой сосудов аллантоиса. В глу­бине этого поля при покачивании яйца просматривается тень зародыша.

При плохом росте зародыша кровеносная система развита слабо, сам он мал, приближен к скорлупе, хорошо виден, особен­но его глаз. Вокруг зародыша просветленного поля не заметно.

При просвечивании неоплодотворенных яиц или с погибшими в первые сутки инкубации зародышами в них отсутствует сеть кровеносных сосудов, содержимое яиц хорошо просматривается. Часто яйца с погибшими зародышами в первые сутки инкубации при просмотре относят к категории неоплодотворенных. Чтобы этой ошибки избежать, необходимо яйца, отнесенные при овоско-пировании к категории неоплодотворенных, вскрыть и под уве­личением (через лупу) оценить состояние бластодисков. В яйцах с погибшими зародышами в первые сутки инкубации можно ви­деть начало развития зародыша.

Зародыши, погибшие после двух суток инкубации, легко об­наруживаются. При просвечивании обычно они видны в виде темного пятна или кольца. Такие яйца относят к категории «кро­вяное кольцо».

При втором просмотре отбирают все яйца с погибшими заро­дышами и оценивают степень развития живых эмбрионов. Развитие их оценивают по состоянию аллантоиса и размеру зароды­ша. При хорошем развитии аллантоис выстилает всю скорлупу внутри яйца, охватывает весь белок и смыкается в остром конце яйца. По всей поверхности яйца видна интенсивно развития сеть кровеносных сосудов, смыкающаяся в остром конце. Зародыш просматривается в виде темного пятна, расположенного в сере­дине яйца, практически занимающего весь его поперечный диа­метр.

При отставшем развитии аллантоис не охватывает весь белок яйца, не достигает его острого конца и не смыкается в нем. В остром конце яйца четко просматривается светлый участок, лишенный аллантоиса и кровеносных сосудов и занятый белком. Сеть кровеносных сосудов развита слабо, сам зародыш отстает в росте, просматривается в виде малого темного пятна в середи­не яйца.

Яйца с погибшими зародышами обнаруживаются при просве­чивании довольно легко из-за атрофии сосудов кровеносной си­стемы и исчезновения из них крови. Зародыши видны в виде темного бесформенного пятна, свободно перемещающегося при покачивании яйца. Все отобранные яйца с погибшими зародыша­ми относят к категории «замершие». Для уточнения причин ги­бели яйца с погибшими зародышами вскрывают и подвергают патологоанатомическому анализу.

При третьем просмотре отбирают все яйца с погибшими за­родышами и оценивают степень развития живых эмбрионов. Раз­витие их оценивают по величине, положению шеи, состоянию воздушной камеры, наличию (состоянию) кровеносной системы аллантоиса. При хорошем развитии эмбрион занимает всю по­лость яйца, острый конец не просвечивается, воздушная камера большая, часто имеет ломаную очерченность границы с эмбрио­ном, зародыш выпячивает шею в воздушную камеру (заметна тень ее при движениях зародыша), кровеносная сеть сосудов аллантоиса ни в тупом, ни в остром конце не просматривается.

При отсталом развитии эмбрион мал, занимает не все яйцо, в остром и тупом конце просматривается сеть кровеносных сосу­дов аллантоиса, граница воздушной камеры с эмбрионом прямая, выпячивания шеи не наблюдается. У сильно отсталых эмбрионов часто виден в остром конце неиспользованный белок. Обычно степень развития эмбрионов при третьем просмотре характери­зует готовность их к вылуплению.

Яйца с погибшими зародышами при третьем просмотре обна­руживают по отсутствию в них сети кровеносных сосудов, запол­ненных кровью, зародыш недоразвит, неподвижен. Все яйца с погибшими эмбрионами при втором просмотре относят к катего­рии «замершие». Зародыши, погибшие в период вывода, относят к категории «задохлики».

Для уточнения причин гибели эмбрионов их вскрывают и под­вергают патологоанатомическому анализу.

Для проверки работы инкубатора и соответствия режима ин­кубации проводят вскрытие яиц с живыми зародышами. Для вскрытия берут не менее 10 яиц из партии.

Первое вскрытие проводят в период интенсивной дифференцировки зародыша, в возрасте 36—48 ч. Зародыш при помощи кольца из фильтровальной бумаги снимают с желтка и затем под увеличением (лупа) оценивают его состояние. Обычно опре­деляют размеры бластодермы, светлого поля, зародыша, под­считывают число пар сомитов.

При втором вскрытии определяют размер (длину) и массу эмбрионов, состояние внезародышевых органов (амнион, желточный мешок, аллантоис), учитывают количество новой плазмы. Третье вскрытие проводят в период полного использования белка зародышем, оценивая размер и массу эмбриона, количест­во неиспользованного белка, амниотической и аллантоисной жид­кости.

Во всех случаях при вскрытии эмбрионов учитывают внеш­ние возрастные признаки, которые при сравнении со стандарт­ными показателями дают возможность судить о степени разви­тия в данный период инкубации.

При вскрытии яиц с погибшими эмбрионами прежде всего определяют катего­рию погибших и ориентировочный возраст гибели.

Обычно всех погибших эмбрионов условно делят на три катего­рии: «кровяное кольцо», «замершие» и «задохлики».

Если повышенная смертность зародышей происходит в пер­вые двое суток инкубации, то это может быть связано с исполь­зованием в инкубации долго хранившихся яиц или яиц, хранив­шихся в неблагоприятных условиях; гибель эмбрионов с 3-х по 8-е сутки может быть следствием их сильного перегрева или сни­жения качества яиц в связи с нарушением питания несушек; отход в середине инкубации с 6—8-х суток до переноса на вывод обычно связан с низким качеством инкубационных яиц; повы­шенная смертность в период вывода в большинстве случаев об­условлена нарушением режима инкубации.

Важные признаки, характеризующие развитие эмбрионов

интенсивность наклева и

Продолжительность инкубации характеризует­ся отрезком времени с закладки яиц в инкубатор до выборки молодняка из инкубатора, выраженным в часах или сутках

При снижении ка­чества яиц и нарушениях режима инкубации продолжительность инкубации изменяется в ту или иную сторону, и это нарушает развитие эмбрионов.

Наклев и вывод зависят от многих факторов, но чем они ин­тенсивнее, тем лучше эмбрионы были подготовлены к вылуплению. Растянутый наклев и вывод характеризуют нарушения эм­брионального развития, вызванные низким качеством используе­мых яиц, отклонениями в технологии подготовки их к инкубации и несоответствием инкубационного режима.

Основной прием биологического контроля после окончания инкубации — качественная оценка полученного молодняка. Для характеристики контролируемой партии яиц проводят выбороч­ную оценку молодняка по контрольным лоткам или по выведен­ной партии.

Причины снижения качества суточного молодняка и повышен­ной выбраковки выясняют путем патологоанатомического анализа. Для вскрытия берут пробу из партии отбракованного молодняка или из контрольных лотков, заранее взятых для биоконтроля.

Для более детальной оценки выведенной партии молодняка, предназначенного для выращивания, проводят выборочную оцен­ку взятой из нее пробы по морфологическим и биотехническим по­казателям при вскрытии. Для вскрытия берут не менее 20 голов молодняка известного возраста, выведенных из яиц известной массы в контрольных лотках, находящихся ранее под наблюдени­ем.

Дата добавления: 2014-03-01 ; просмотров: 450 ; Нарушение авторских прав

http://lektsiopedia.org/lek-6268.html

Биотехнология в воспроизводстве и селекции крупного рогатого скота имеет

особое значение. Крупный рогатый скот относится к одноплодным видам

млекопитающих. Поэтому от одной коровы можно получить в лучшем случае одного

теленка в год, в то время, как в её яичнике содержатся сотни тысяч незрелых

половых клеток (ооцитов), представляющих огромный генетический резерв.

Кардинальное решение проблемы ускоренного воспроизводства скота состоит в

том, чтобы перейти к нетрадиционным способам увеличения плодовитости. Для

этого применяется целый ряд биотехнических методов, разработанных на основе

углубленных исследований репродуктивной функции, её регуляции, а также на

совершенствование приемов манипуляции с эмбрионами, половыми и соматическими

клетками. В перспективе биотехнология рассматривается как основа ускоренного

воспроизводства высокопродуктивных животных и целых популяций.

В последнее время приобрела практическое значение трансплантация эмбрионов,

которая рассматривается как эффективный метод биотехнологии ускоренного

размножения высокоценных племенных животных. Некоторые вопросы трансплантации

эмбрионов крупного рогатого скота рассмотрены в данной курсовой работе.

В большинстве случаев в качестве коров-доноров отбирают матерей потенциальных

племенных быков. Благодаря этому обеспечивается высокий селекционный

дифференциал. Оценка и отбор коров-доноров, выделенных в группу матерей

быков, проводят в два этапа. На первом этапе племенная ценность донора

оценивается по главным признакам молочного скота — по уровню молочной

продукции и жирномолочности. На втором этапе, когда отобраны доноры с высокой

племенной ценностью по главным признакам, число признаков в зависимости от

цели селекции расширяется. К ним относят форму вымени и сосков, свойства

молокоотдачи, резистентность, крепость костяка и копыт, тип и

Нужно иметь в виду, что оценка коровы-донора по родословной и собственной

продуктивности является не окончательной, так как в этом случае не

учитывается эффект расщепления и рекомбинации генов. Поэтому окончательно

оценивать корову-донора можно только при получении и оценке ее потомства.

Высокие затраты на получение телят путем трансплантации эмбрионов

обусловливают необходимость отбирать таких доноров, от которых регулярно

можно получать большое количество эмбрионов. Предпочтение следует отдавать

коровам,сохранившим в течение трех отелов стабильную воспроизводительную

способность. Исследованиями установлено, что потенциальные коровы-доноры с

хорошими и устойчивыми воспроизводительными способностями отличаются

предрасположенностью к воспроизводству эмбрионов, которые можно регулярно

получать через каждые два месяца.

Межотельный период является интегральным показателем воспроизводительной

способности коров. Его составные части: сервис-период и период

Сервис-период более точно и намного раньше, чем интервал между отелами,

выявляет потенциальные возможности воспроизводительной функции у коров. Он

тесно связан с межотельным периодом (коэффициент корреляции составляет 0.9).

Оптимальный сервис-период не должен превышать 80 дней. Однако анализ сервис-

периода, проведенный в ведущих племенных стадах черно-пестрой породы,

показал, что данный показатель воспроизводительной функции коров имеет

высокий коэффициент изменчивости, который составил 61%.

Сервис-период в основном зависит от интервала между отелом и первым

осеменением, и интервала между первым и последним, т.е. эффективным

осеменением. Высокопродуктивных коров следует осеменять на втором месяце

после нормального отела. Это обусловлено тем, что первый половой цикл

проявляется слабо, половая охота клинически плохо определяется или вовсе не

Первое осеменение коров на втором месяце после отела не удлиняет сервис- и

межотельный период. При оптимальном сервис-периоде до 80 дней после первого и

второго осеменений средняя оплодотворяемость коров составляет 95-98%, а

продолжительность межотельного периода не превышает одного года.

Для оценки воспроизводительных способностей коров, отобранных в качестве

потенциальных доноров, необходимо анализировать такие параметры как

оплодотворяемость от первого осеменения и индекс осеменения. При правильной

технике осеменения и своевременном определении половой охоты

оплодотворяемость коров от первого осеменения должна составлять в среднем

Важным показателем воспроизводительной способности коров является индекс

осеменения, т.е. количество осеменений на одно оплодотворение. Индекс

осеменения характеризуется высокой степенью изменчивости — коэффициент

вариабельности может достигать 70%. Существенное влияние на изменчивость

индекса осеменения оказывают такие факторы, как продолжительность периода от

отела до первого осеменения, своевременное выявление коров в половой охоте,

оплодотворяющая способность спермы быка и др. Индекс осеменения коров,

выделенных в группу потенциальных доноров, не должен превышать 1.5. В

идеальном случае потенциальная корова-донор должна иметь индекс осеменения

равный 1. У коров-доноров при всех отелах должны отсутствовать осложнения

(мертворождаемость, задержание последа, послеродовые заболевания половых

Через 15-20 суток после отела ветеринарный специалист методом ректальной

пальпации контролирует у потенциальной коровы-донора состояние половых

органов, чтобы исключить такие нарушения воспроизводительной функции как

киста яичника, гипофункция, воспаление яичниковой связки, эндометриты.

Важным звеном в современной биотехнологии трансплантации эмбрионов крупного

рогатого скота является гормональноевызывание суперовуляции у коров-доноров.

В группу доноров переводят только тех коров, которые положительно реагируют

на введение гормонов. Для стимуляции множественной овуляции используют

гонадотропин СЖК в сочетании с простагландинами и другими биологически

активными веществами [3]. Этот способ, как показывает практика, позволяет

вызвать суперовуляцию примерно у 70% коров.

Одним из существенных недостатков этого способа суперовуляции является крайне

высокая степень вариабельности числа овуляций, даже при использовании одной и

той же концентрации гонадотропина СЖК. Она составляет от 0 до 50 овуляций на

одну корову-донора. Оптимальным результатом суперовуляции является выход из

яичника в воронку яйцепровода 10-20 яйцеклеток.

Shelton, J.N. [7], подытоживая результаты исследований, пришел к выводу, что

на инъекции гонадотропинов 25-35% коров-доноров не реагируют, а у

положительно реагирующих коров (3 и более овуляций) вариабельность реакции

яичника настолько велика, что становится невозможным надежное планирование

программы пересадки эмбрионов. Kenneth, L.W. [4] считает, что с учетом

имеющейся изменчивости лишь половина коров, реагирующих на введение

гонадотропинов, может дать 4-5 эмбрионов, пригодных для трансплантации.

Следовательно, в основном эмбрионы можно получить менее чем от половины

первоначально тщательно отобранных потенциальных коров-доноров.

По современному представлению реакция коров на суперовуляцию в значительной

степени определяется количеством и качеством фолликулов яичников во время их

стимуляции гонадотропинами. Экспериментально было доказано, что во время

суперовуляции для получения хорошей реакции необходимо наличие определенного

количества малых антральных фолликулов, чувствительных к гонадотропной

стимуляции. Недостаток таких фолликулов, или напротив, наличие больших по

размеру фолликулов снижают уровень реакции или она вообще отсутствует. Это

может свидетельствовать об интраовариальном регулировании процесса

суперовуляции. Поскольку фолликулы растут асинхронно, то в каждый период

инъекция гонадотропинов будет оптимальной лишь для ограниченного числа

Кроме размера фолликула, на реакцию введения гонадотропинов существенное

влияние оказывает интенсивность митотического индекса, которая у нормального

фолликула повышается при формировании полости. Установлено что высокий

митотический индекс неатретических фолликулов положительно коррелирует с

Имеются данные, свидетельствующие о том, что на реакцию гонадотропинов

отвечают только те малые антральные фолликулы, размеры которых не превышают 2

мм. Установлено что такие фолликулы гормонально активны и быстро овулируют.

Атретические фолликулы с высоким митотическим индексом, напротив, не

овулируют, а после прохождения фазы лютеинизации подвергаются её воздействию

и имитируют наличие жёлтого тела.

Следовательно, для эффективной суперовуляции решающим является

физиологическое состояние фолликулов в лютеиальной фазе яичника.

Анализ работы станций по пересадке эмбрионов показал, что хорошими донорами

можно считать коров, которые после многократных суперовуляций имеют хорошую

реакцию яичника и производят большое число пригодных для пересадки эмбрионов

за одно вымывание. Однако лишь небольшая часть доноров обнаруживает повторную

реакцию яичников после вызывания суперовуляции. В основном же коровы-доноры

нерегулярно отвечают на повторную гормональную обработку, поэтому количество

овуляций и выход эмбрионов не являются стабильными.

Для оценки предрасположенности, или потенциальной изменчивости коров на

пригодность в качестве доноров, были рассчитаны вариансы признаков, на основе

которых был определен коэффициент повторяемости. Рассчитанные коэффициенты

повторяемости признаков предрасположенности коров в качестве доноров

колебались в пределах 17.3-23.3%. Это свидетельствует о том, что по итогам

оценки за первое вымывание эмбрионов надежность повторного результата

составит лишь 20%. Следовательно, по оценке признака пригодности за первое

вымывание эмбриона невозможно достоверно судить о пригодности коровы в

Изменчивость пригодности коров в качестве доноров включает наследственные и

ненаследственные факторы. Причем вклад ненаследственных факторов значительно

выше вклада факторов генетических.

Отмечено, что прекращение кормления донора после обработки гонадотропинами

достоверно уменьшает реакцию яичника на введение гормонов. Для суперовуляции

и получения биологически полноценных эмбрионов необходимо обеспечить

полноценное кормление донора, сбалансированное не только по основным

питательным веществам, но особенно по аминокислотам и микроэлементам.

Кормление доноров должно быть таким, чтобы они находились в хорошем

Для получения суперовуляции наиболее широкое распространение во многих

странах мира получил ГСЖК с простагландинами.

Хороших результатов суперовуляции можно ожидать, когда к моменту инъекчии

гонадотропина в яичниках коровы функционирует желтое тело диаметорм 1.5 см.

При наличии в одном из яичников развитого фолликула диаметром 10 мм

полиовуляция снижается. Интенсивность множественной овуляции также снижается

когда кроме хорошо развитого желтого тела в яичнике находится развитый

фолликул, фолликулярная или лютеиновая киста. Следовательно, эффективность

суперовуляции в большой степени определяется физиологическим состоянием

На число овуляций существенное влияние оказывает интервал между временем

введения ГСЖК и началом половой охоты. Определен оптимальный интервал, во

время которого можно получить наибольшее количество овуляций, он составляет

4-7 суток. При уменьшении этого срока до 1-3 суток число овуляций существенно

снижается, а при увеличении свыше 7 суток, хотя число овуляций возрастает, но

формируются биологически неполноценные яйцеклетки.

Наивысший эффект суперовуляции достигается при введении ГСЖК между 10-12 сут

эстрального цикла (середина лютеальной фазы) и через 48 часов простагландина

F2a (или его аналога), вызывающего регрессию желтого тела, половую охоту и

овуляцию. В течение 48 часов после инъекции простагландина у 95% коров-

доноров происходит полиовуляция со всеми признаками эструса. При этом доноры

могут быть осеменены только в сжатые сроки. Установлено, что после такой

технологии гормональной обработки коров происходит в среднем 10 овуляций, а

оплодотворяемость яйцеклеток достигает 80%.

Другим гормональным препаратом с суперовуляционным действием является

фолликулостимулирующий гормон ФСГ. Суперовуляцию можно вызвать введением

очищенного ФСГ или его комбинации с лютеинизирующим гормоном ЛГ в соотношении

5:1. В отличие от гонадотропина СЖК ФСГ вводят не однократно, а многократно.

Обобщение многочисленных работ по использованию гонадотропина СЖК и ФСГ

показало, что наблюдается либо одинаковая реакция яичников коров на оба

гонадотропина, либо отмечается лучшая реакция при введении гонадотропина ФСГ.

Как отмечалось, следует иметь в виду, что многократная суперовуляция

подвержена большей вариабельности. Поэтому не все коровы-доноры имеют

одинаковую предрасположенность к многократной суперовуляции. Для эффективной

многократной суперовуляции необходим тщательный отбор доноров по ряду

показателей этого признака.

В заключение следует отметить, что гормональная стимуляция яичников коров,

вызывающая полиовуляцию, связана с активизацией метаболических процессов у

доноров. Поэтому для протекания нормальных процессов оогенеза, оплодотворения

и биологически полноценного формирования и развития зиготы коров-доноров

необходимо обеспечить биологически активными веществами (витамины,

незаменимые аминокислоты). Кроме того, для этой цели используют препарат

4. Осеменение коров-доноров.

Результаты суперовуляции определяются эффективным осеменением коров-доноров.

Проблема оплодотворения яйцеклеток и получения биологически полноценных

эмбрионов все ещё остается открытой. Как показывают результаты исследований,

только 60-65% эмбрионов пригодны для трансплантации, остальные яйцеклетки,

образовавшиеся в результате гормональной обработки гонадотропинами,

оказываются либо неоплодотворенными, либо после оплодотворения отстают в

развитии или дегенерируют. Причина этих нарушений остается неизвестной.

Для искусственного осеменения коров-доноров необходимо использовать сперму

только выдающихся быков-производителей, достоверно оцененных по качеству

потомства. Как отмечалось, надежным критерием наследственных качеств быка

служит коэффициент повторяемости, т.е. коэффициент регрессии будущих дочерей

быка на число фактически имеющихся дочерей. Если генетическое превосходство

дочерей быка, выраженное величиной отклонения от сверстниц, умножить на

коэффициент повторяемости, то полученная величина будет характеризовать

генетическое превосходство будущих дочерей быка, или предсказанную разность.

Предсказанная разность является одним из наиболее объективных качеств быка,

разработанных в современной селекции молочного скота.

Для искусственного осеменения коров-доноров следует использовать, как

правило, сперму производителей 1-й племенной категории, т.е. таких, племенная

ценность которых превышает среднюю популяционную величину на два стандартных

отклонения. В этом случае существенно повышаются темпы селекции и улучшается

племенная ценность новой генерации.

Племенной подбор быков-производителей и коров-доноров осуществляется по

заказному или целевому спариванию родителей. В его основе должен лежать

принцип индивидуального подбора в соответствии с селекционной программой

совершенствования существующих или создания новых пород, типов и линий.

Требования к оценке оплодотворяющей способности спермы быков, предназначенной

для осеменения коров-доноров, должна быть значительно выше, чем при

оплодотворении остальных коров. Для повышения оплодотворяемости доноров и

выхода эмбрионов, наряду с использованием высококачественной спермы,

необходимо определить сроки половой охоты для своевременного проведения

искусственного осеменения. Как правило, коров с гормонально вызванной половой

охотой осеменяют дважды: первый раз при начале появления половой охоты и

второй — через 12-24 часа.

В нашей стране коров-доноров искусственно осеменяют дважды в день с

интервалом 10-12 часов каждый раз двумя-тремя дозами замороженной спермы. Так

как при суперовуляции повышается число овулировавших яйцеклеток, в каждой

дозе спермы должно быть не менее 50 млн подвижных спермиев.

День, в который проводится искусственное осеменение коровы-донора, считается

датой оплодотворения. С этого дня начинается отсчет развития эмбрионов in

vivo до их извлечения.

5. Извлечение и оценка эмбрионов.

Эффективность метода трансплантации во многом определяется способом

извлечения эмбрионов. Оплодотворенные яйцеклетки от суперовулированных коров-

доноров могут быть извлечены тремя способами: после убоя коровы-донора;

Извлечение эмбриона после убоя коровы-донора. Самым простым и надежным

способом извлечения эмбрионов является убой коровы-донора. Этот способ

практиковался только на первых этапах освоения метода трансплантации. В

настоящее время из-за потери генетически ценной коровы-донора он не

Извлечение эмбриона хирургическим способом. Важным моментом,

обеспечивающим эффективность извлечения эмбрионов, является определение стадии

их развития и места положения в поовых путях коровы-донора. Для трансплантации

рекомендуется использовать бластоцисты, поэтому эмбрионы извлекают между 7-8-ми

сутками после первого искусственного осеменения (До). Имеется несколько

способов хирургического извлечения эмбрионов: разрез верхнего свода влагалища,

лапаротомия по белой линии живота и лапаротомия в области голодной ямки.

Хирургический способ извлечения эмбрионов является трудоемким, дорогостоящим

и, что особенно важно, им нельзя пользоваться многократно. В настоящее время

хирургический способ извлечения применяется в редких случаях, главным образом

в научных целях.

Извлечение эмбрионов нехирургическим способом. Основное преимущество

нехирургического способа извлечения эмбрионов заключается в простоте

манипуляций. Для этого не требуется специального операционного помещения.

Эмбрионы можно извлекать непосредственно в производственных условиях. С

селекционной точки зрения, при правильном применении нехирургического способа

воспроизводительная способность доноров не нарушается, что позволяет

многократно использовать генетически ценных коров-доноров для получения от них

большого числа потомков.

В общем виде извлечение эмбрионов нехирургическим методом происходит по

следующей схеме. Коров-доноров обследуют на наличие желтых тел, чистят и

моют, ограничивают рацион и кратность кормления, а за сутки прекращают

кормление и поение. Перед самым извлечением эмбрионов дезинфицируют наружные

половые органы коров-доноров. Извлекают эмбрионы под местной анестезией. В

рог матки вводят продезинфицированный двухканальный резиновый или

пластмассовый катетер с надувным баллончиком, в который нагнетают 10-155 куб

см воздуха. Выход из рога матки закрывают, надувая воздухом тонкостенный

резиновый баллончик. Затем в рог вводят промывную жидкость и осторожно

массируют, чтобы отделить эмбрионы от стенок матки. В качестве промывной

среды применяют PBS до 500 мл. Этот состав используется и для

кратковременного культивирования эмбрионов.

Вымывание повторяют 5-8 раз. Основную часть эмбрионов извлекают в первых

трех-четырех смывах. Промывание в обоих рогах матки, включая введение

катетеров, продолжается 20-50 минут. За это время можно извлечь более 50%

эмбрионов, находящихся на стадии морулы или бластоцисты.

После вымывания эмбрионов в матку вводят раствор антибиотика с целью

Во многих странах разработаны различные устройства для нехирургического

извлечения эмбрионов. В нашей стране в ряде институтов ВАСХНИЛ успешно

освоены нехирургические методы извлечения, позволяющие получать 60% от числа

овулировавших яйцеклеток. Нужно иметь в виду, что в среднем из вымытых

яйцеклеток до 25% оказываются неоплодотворенными или дезинтегрированными.

Причины выхода биологически неполноценных зигот до сих пор окончательно не

Кратковременное культивирование и хранение эмбрионов. Манипуляции с

ранними эмбрионами, находящимися на предимплантационных стадиях развития, т.е.

от момента их получения до введения в рога матки реципиента, занимают от 1 до 5

часов. В этот период нужно создать оптимальные условия, обеспечивающие

сохранение их биологических качеств. Кратковременное хранение эмбрионов дает

также возможность транспортировать их в другие хозяйства.

Эмбрионы крупного рогатого скота можно сохранить путем пересадки их в

яйцепровод самок других видов млекопитающих. Лучше всего обеспечивается

нормальное предимплантационное развитие эмбрионов коров в яйцепроводе

крольчих. Установлено, что эмбрионы коровы в яйцепроводе крольчихи могут

успешно развиваться до стадий, пригодных для трансплантации реципиентам, т.е.

до морулы и бластоцисты. Недостатком этого метода является его трудоемкость и

возможные потери зигот при их переносе. В настоящее время широкое

распространение получил метод краткосрочного хранения эмбрионов in vitro.

После извлечения и оценки на жизнеспособность эмбрионы переносят в

питательные среды с температурой 37 градусов. Большинство сред, в которых

культивируют и хранят эмбрионы, включают растворы солей, аминокислоты с

бикарбонатным ионом как буферным агентом, обеспечивающим pH в пределах 7.2-

7.6. Проведенные исследования показали, что продолжительность культивирования

без потери биологических качеств эмбрионов возможна до 95 часов.

В последние годы проводятся исследования по краткосрочному хранению эмбрионов

in vitro при их охлаждении ниже 37 градусов. Разработка этого метода имеет

большое практическое значение, т.к. позволяет существенно упростить

манипуляции с эмбрионами и надежнее обеспечивает их транспортировку.

Оценка эмбрионов. Оценка эмбрионов крупного рогатого скота производится

несколькими методами. Наибольшее распространение получил морфологический метод.

Установлено, что результаты имплантации эмбрионов зависят от того, насколько

полно оценена способность оплодотворенных яйцеклеток к развитию.

По морфологическим признакам и эмбриональной стадии развития, эмбрионы можно

классифицировать на пригодные и непригодные к трансплантации. При

морфологической оценке эмбрионов основное внимание обращают на фрмулу зиготы,

состояние её зоны пеллюцида, число бластомеров, равномерность дробления,

выраженность эмбриобласта и трофобласта.

Кроме морфологической, дается оценка эмбрионов по адсорбционным свойствам

оболочек и цитоплазмы бластомеров к различным красителям. Для улучшения

морфологической оценки используют флюоресцентную окраску, позволяющую

отличить живые эмбрионы от погибших. В частности, этот метод наиболее

пригоден для оценки жизнеспособности эмбрионов крупного рогатого скота после

их культивирования и замораживания. С помощью флюоресцентных красящих веществ

FDA и DAP1 через 3-10-минутный период возможно быстрое и достаточно надежное

определение способности эмбрионов к развитию в ранних стадиях. Живые эмбрионы

и даже живые бластомеры ярко флюоресцируют после инкубации в FDA, но не

флюоресцируют после инкубации в DAP1. У погибших эмбрионов или бластомеров

реакции обратные. Эти методы позволяют более точно определять

жизнеспособность эмбрионов под микроскопом.

Ряд авторов предлагает использовать синьку Эванса. В живых эмбрионах при

температуре 37 градусов ею окрашивается только зона пеллюцида, которую затем

обесцвечивают в растворе Рингера. В мертвых же эмбрионах краска прочно

фиксируется на бластомерах.

Как считает М. И. Прокофьев [2], могут быть гистохимические методы оценки

жизнеспособности эмбрионов, основанные на специфических реакциях структурных

элементов и веществ клеток к витальным и флюоресцентным красителям. Такие

реакции протекают очень интенсивно и быстро, что позволяет ускорить процесс

Однако следует учитывать, что флюоресцентная окраска лишь дополняет и

улучшает основной метод оценки эмбрионов — морфологический. Наиболее важными

морфологическими признаками при оценке жизнеспособности эмбрионов служат

объем, окраска, расположение клеток, величина перивиталлинового пространства

и вид неповрежденной зоны пеллюцида. Идеальный эмбрион должен быть

компактным, сферической формы, с однородной окраской, с клетками одинаковой

величины, с гладкой, плоской и равномерно сформированной зоной пеллюцида, без

включений в перивителлиновом пространстве.

Важнейшим критерием для оценки качества эмбрионов является интенсивность

развития стадий. Эмбрионы с замедленным развитием не используются для

пересадки, замораживания и других манипуляций.

При оценке качества эмбриона в нашей стране принята 5-балльная шкала с учетом

следующих показателей: соответствия стадии развития эмбриона его возрасту;

правильности формы прозрачной оболочки и ее целостности; равномерности

дробления бластомеров, состояния цитоплазмы; прозрачности перивителлинового

Наиболее пригодными для трансплантации являются эмбрионы, извлеченные из

матки коровы-донора на 7-8 сутки после первого осеменения. Как показывают

результаты исследований и практика, в это время нормально развитые эмбрионы,

пригодные для трансплантации реципиентам, находятся в стадии поздней морулы

или бластоцисты. Эти эмбрионы используют для пересадки гормонально

Выбраковке подлежат дегенерированный неоплодотворенные яйцеклетки (ооциты),

которые можно обнаружить при извлечении эмбрионов. Морфологически

неинтактные, непригодные для трансплантации эмбрионы имеют дефектную морулу,

или бластоцисту, признаками которых являются дефекты прозрачной оболочки,

распад бластомеров, разная величина бластомеров, нарушение межклеточной

В стадии поздней бластоцисты непригодные для трансплантации эмбрионы

характеризуются деформацией и ослаблением бластомеров, разрывом межклеточных

связей и целостности зоны пеллюцида.

6. Пересадка эмбрионов реципиентам.

В качестве реципиента отбирают гинекологически здоровых коров после двух-трех

нормальных половых циклов. Для отбора реципиентов основным показателем

является отсутствие гинекологических отклонений, а продуктивные, племенные и

породные качества большой роли не играют. Вместе с тем, у реципиентов с

плохой упитанностью, низкой оплодотворяемостью после первого осеменения,

могут плохо приживаться эмбрионы. В среднем на каждого донора отбирают 5-6

реципиентов. Большинство специалистов считает, что в качестве реципиентов

наиболее пригодны полновозрастные телки с хорошими племенными кондициями.

Основным условием хорошего приживления эмбрионов служит синхронность

проявления половой охоты у доноров и реципиентов. Разница во времени в

проявлении половой охоты не должна превышать 24 ч, оптимальные же результаты

получаются при разнице не более 12 часов.

При современном уровне техники трансплантации рекомендуется пересаживать

эмбрионы сразу после их извлечения из рогов матки донора и оценки.

В настоящее время пересадка эмбрионов реципиентам производится хирургическим

и нехирургическим способами. При пересадке нужно точно знать местонахождение

эмбриона в половых путях коровы. Это связано с переходом предимплантационного

периода, в котором находится эмбрион до пересадки, в новый период

эмбрионального развития — имплантационный. При естественном течении

эмбрионального периода зародый на стадии морулы или бластоцисты находится в

верхнем отделе рога матки, поэтому и наиболее благоприятным местом для его

аппликации является верхняя часть рога матки реципиента. Установлено, что

пересадка эмбрионов глубоко в рог матки реципиента лучше всего обеспечивается

хирургическим способом. При нехирургической же пересадке, которая происходит

в период диэструса место аппликации эмбриона в роге матки контролируется

Эффективность хирургического способа пересадки эмбриона составляет 60-70%, а

число телят — 3-4 на донора. Хирургический способ использовали в основном до

середина 70-х годов. Однако он требует больших затрат средств. Кроме того,

широкое применение хирургического метода сдерживается сложностью проведения

операций в производственных условиях, получением травм вследствие резекции

мышц, и невозможностью многократного использования реципиента. Поэтому

последние 10-15 лет пересадку эмбрионов в основном осуществляют

При нехирургической пересадке основным достоинством, кроме простоты и

экономичности, является возможность многократного использования реципиента.

Разработано несколько способов нехирургической пересадки эмбрионов. Однако

все они основаны на одном принципе — введении эмбриона в рог матки через

шейку, вследствие чего этот способ назван также цервикальным.

После пересадки эмбрионов проводят тщательный контроль за реципиентами,

обращая особое внимание на возможное проявление у них повторной половой

Для установления стельности у коров-реципиентов используют несколько методов:

визуальный; по уровню прогестерона в крови или молоке; клинический, главным

образом путем ректальной пальпации.

Важным звеном селекционно-племенной работы является достоверность

установления истинного происхождения телят, полученных при трансплантации

эмбрионов от генетически ценных родителей. Истинное происхождение можно

установить по группам крови и типам белков крови. Пробу крови берут у теленка в

возрасте от 4 недель до 4 месяцев.

Существенной причиной, снижающей эффективность нехирургической пересадки

эмбрионов, является возможное повреждение эндометрия при введении катетера. В

то же время обобщение результатов исследований по нехирургической пересадке

эмбрионов показывает, что эффективность пересадки в большей степени зависит

не от того, как глубоко будет введен катетер в рог матки, а от того,

насколько правильно выполнено введение.

Однако на этот счет имеется и другая точка зрения [7]: что конструкция

приборов существенно не влияет на результаты извлечения и пересадки

эмбрионов. Эти результаты более связаны с типом гонадотропина, квалификацией

оператора, качеством и стадией развития эмбрионов.

В целом же следует отметить, что нехирургический метод пересадки эмбрионов

обеспечивает аппликацию зародышей в среднем 50-60%, а применение маточных

релаксантов перед пересадкой — до 75%. Это существенно выше, чем при

хирургическом методе. Технология нехирургического метода трансплантации

сходна с искусственным осеменением коров и продолжается 3-5 минут, или 15-20

пересадок в час.

Особого внимания заслуживает приём,

нехирургической пересадке двух эмбрионов, по одному в каждый рог матки,

что еще больше повышает эффективность трансплантации. Этот приём может быть

применен для повышения частоты рождения разнояйцевых (дизиготных) двоен. Он

позволяет получить двойные отелы у коров, особенно мясных пород, намного

быстрее, чем генетическим путем (т.е. селекцией).

Результаты проведенных исследований показывают, что нехирургическая пересадка

дополнительного эмбриона во второй рог матки дает возможность увеличить выход

новорожденных телят на 30%. При пересадке двух эмбрионов в каждый рог матки

частота двоен составляет в среднем 55-60%, вместо 2% при естественном

Можно пересаживать (подсаживать) эмбрион и оплодотворенной корове, но в

контрлатеральный по отношению к желтому телу в яичнике рог матки. Средняя

приживляемость эмбриона осемененной корове при нехирургической подсадке

Обобщая результаты экспериментов по нехирургическому методу пересадки

эмбрионов, можно придти к заключению, что пересадка двух эмбрионов в два рога

матки реципиента или подсадка одного предварительно осемененному реципиенту в

контрлатеральный рог матки являются эффективными и перспективными методами в

биотехнологии трансплантации эмбрионов.

7. Криоконсервация эмбрионов.

Эффективность трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота во многом

определяется условиями хранения зигот. Самым эффективным и перспективным

методом консервации эмбрионов является их глубокое заморахивание

(криоконсервация) в жидком азоте при температуре -196 градусов. Разработка

метода долговременного хранения криоконсервированных эмбрионов значительно

расширяет возможности трансплантации. Только в этом случае она может быть

надежной биотехнологической основой селекционной программы.

Долговременное хранение глубокозамороженных эмбрионов имеет ряд преимуществ.

Отпадает необходимость в содержании больших стад или групп реципиентов, так

как пересадки могут быть проведены в любое время независимо от сроков взятия

эмбрионов от доноров, что существенно повышает рентабельность трансплантации.

Кроме того, криоконсервация эмбрионов позвозяет создавать эмбриобанки от

генетически ценных животных, а также сохранять генофонд редких и исчезающих

пород и транспортировать эмбрионы в любые страны мира. По оценке специалистов

криоконсервация эмбрионов экономически оправдана, она исключает генетический

дрейф, т.е. изменение частоты генов в популяции, вызванные случайными

При соблюдении правильной биотехнологии выживаемость эмбрионов составляет

90%, а стельность коров-реципиентов после нехирургической пересадки находится

в пределах 50-55%. Однако нередко в производственных условиях при

несоблюдении технологии замораживания-размораживания выживаемость эмбрионов

уменьшается, что существенно снижает рентабельность криоконсервации.

Обосновано, что использование метода криоконсервации эмбрионов в

производственных условиях является рентабельным только в том случае, если

выживаемость эмбрионов после размораживания будет не менее 80%, а процент

стельности коров-реципиентов составит 55-60%.

По принятой в России технологии, эмбрионы замораживают с применением

автоматических устройств, обеспечивающих регулирование скорости охлаждения в

заданных режимах. Эмбрионы замораживают в пробирках 50×6 мм или в ампулах

вместимостью 1 мл. В пробирку или ампулу вносят 1-4 эмбриона от одного донора

и 0.4 мл раствора криопротектора (1.5 М ДМСО или 10%-ный раствор глицерина).

Ампулы перед замораживанием запаивают на пламени газовой горелки. Ампулы или

пробирки маркируют, затем охлаждают с 20 до -6 градусов со скоростью 1 градус

в минуту, проводят кристаллизацию, охлаждение со скоростью 0.3 градуса в

минуту и погружают в жидкий азот. Применяется также и другой режим:

охлаждение от -7 до -35 градусов со скоростью 0.3 градуса в минуту; от -35 до

-38 градусов со скоростью 0.1 градус в минуту и погружение в жидкий азот.

Оттаивание эмбрионов производится на водяной бане с температурой 25 или 37

градусов в течение 10-12 секунд. Для хранения и транспортировки замороженных

эмбрионов используют сосуды Дьюара различных типов.

Практика криоконсервации эмбрионов крупного рогатого скота свидетельствует о

том, что на выживаемость эмбрионов существенное влияние оказывает не только

технология глубокого замораживания и оттаивания, но и их качество и стадия

развития. Для успешной криоконсервации следует отбирать эмбрионы без

морфологических нарушений, находящиеся на стадиях поздней морулы или ранней

Необходимость отбора эмбрионов диктуется еще и тем обстоятельством, что у 10%

из них обнаруживается неправильное развитие, а при криоконсервации

повреждаются в среднем еще 25% клеток бластоцисты. Такие эмбрионы испытывают

большую редукцию интактных бластомеров, вследствие чего переживаемость и

дальнейшее развитие после замораживания и оттаивания существенно нарушаются.

Таким образом, соблюдение правильной биотехнологии криоконсервации и

пересадки эмбрионов позволит обеспечить стельность реципиентов на том же

уровне, что и при пересадке свежеполученных эмбрионов. Вместе с тем метод

криоконсервации в будущем может быть существенно упрощен, или вообще можно

будет отказаться от удаления криопротектора и пересаживать эмбрионы

реципиентам непосредственно после оттаивания без дальнейших манипуляций. По

прогнозу специалистов, криоконсервированные эмбрионы могут храниться десятки

8. Влияние трансплантации эмбрионов на генетический прогресс популяции.

Создание банков глубокозамороженной спермы и разработка методов

искусственного осеменения позволили существенно увеличить интенсивность

отбора быков и повысить точность оценки их племенной ценности. На базе

интенсивного использования генетически ценных быков-производителей с

применением искусственного осеменения коров глубокозамороженной спермой темпы

селекции в популяции по сравнению с обычными увеличиваются в 2-3 раза.

В то же время генетический вклад в прогресс селекции матерей быков почти в

два раза ниже вклада отцов быков. Это объясняется низкой интенсивностью

селекции матерей быков и ненадежной оценкой их племенной ценности из-за

получения небольшого числа потомков. Эти ограничения и призвана частично

снять трансплантация эмбрионов. В настоящее время при использовании

трансплантации эмбрионов от одной генетически ценной коровы можно получать

двадцать телят, используя малоценных реципиентов.

Однако нередко возникает вопрос о влиянии реципиента на эмбриональное и

постэмбриональное развитие трансплантата. Прямое генетическое влияние на

эмбрион реципиент не оказывает, так как пересаженная зигота представляет

сформированный генотип, состоящий из гаплоидных наборов хромосом истинных

родителей. Отсутствие прямого генетического влияния реципиента на эмбрион

подтверждают межпородные и межвидовые пересадки зигот, а также

иммуногенетические исследования. В то же время, могут быть вызваны

модификации трансплантата, т.е. ненаследственные изменения признаков,

обусловленные влиянием организма реципиента во время стельности. В отличие от

мутаций, модификации по наследству не передаются. При этом нужно иметь в

виду, что характер и степень фенотипических изменений определяются генотипом

В статье Schaeffer, L.R [5] приведены интересные результаты, полученные при

моделировании селекции молочного скота. В основе использованной модели, в

которую были заложены данные о 2000 коров племенного центра, получены

доля выбракованных коров по болезням 20%;

доля выбракованных коров по продуктивности 10%

доля коров, непригодных для трансплантации эмбрионов 20%

цель селекции — выход молочного жира 150 кг

генетическое превосходство первотелок 2 кг

генетическое превосходство быков

Дополнительный генетический прогресс за генерацию на основе применения

трансплантации эмбрионов показан в нижеприведенной таблице:

a — генетический прогресс при трансплантации эмбрионов;

b — генетический прогресс без трансплантации эмбрионов;

c — превосходство a над b, выраженное в процентах.

Из анализа данной таблицы видно, что с увеличением пригодных для

трансплантации эмбрионов и повышением процента стельности коров, генетический

прогресс возрастает. Однако, этот процесс происходит нелинейно.

В этой же статье приведены данные по генетическому сдвигу молочной продукции

при разных методах воспроизводства и селекции молочного скота. При этом

сравнивались результаты общепринятой программы селекции, результаты

трансплантации эмбрионов, и результаты трансплантации эмбрионов при

интенсивном отборе быков. Результаты показаны в нижеприведенной таблице:

Примечание: предусматривается получение 10 телят от одного донора в год;

общий интервал между поколениями 22 года (Iоб=5, Iок=5, Iмб=6, Iмк=6);

точность оценки племенной ценности: rоб=0.8, rок=0.8, rмб=0.6, rмк=0.6.

Из приведенных данных видно, что генетический прогресс по молочной

продуктивности существенно повышается при использовании трансплантации

эмбрионов, увеличивающей интенсивность селекции по материнской линии,

особенно среди матерей быков. Использование трансплантации позволяет повысить

темпы генетического прогресса с 94.3 до 124.8 кг молока в год, т.е. на 32%.

Вместе с тем, при повышении интенсивности селекции быков-производителей в

сочетании с использованием трансплантации эмбрионов, генетический прогресс

повышается до 148.2 кг молока в год, т.е на 57%.

Трансплантация эмбрионов занимает прочное место в современных программах

селекций. Метод трансплантации вместе с искусственным осеменением

рассматривается как основа современной биотехнологии воспроизводства

высокопродуктивных племенных животных, несмотря на относительно высокий

уровень затрат при использовании этого метода. В настоящее время в России

производится ежегодно более десяти тысяч эмбриопересадок, в будущем же

планируется получать методом трансплантации не менее 25-30 тысяч телят

ежегодно. Новые методы биотехнологии, по мнению ученых, в будущем приведут к

коренному изменению в воспроизводстве и селекции крупного рогатого скота.

10. Список использованной литературы.

1. Завертяев Б. П. Биотехнология в воспроизводстве и селекции

крупного рогатого скота. Л. «Агропромиздат», 1989.

2. Прокофьев М. И. Регуляция размножения сельскохозяйственных животных.

3. Чернева И. Р. Лекции по биотехнологии и пересадке эмбрионов.

Московская ветеринарная академия им. Скрябина, 1997.

4. Kenneth, L.W.. Embryo Cultivation//Biotechnology Magazine vol.1 #2, 1994.

5. Schaeffer, L.R. Effects of embryo transfer in beef cattle on

genetic evaluation methodology//Journal of animal science. Oct

6. Sertich, P.L. Transcervical embryo transfer in performance

mares//Journal of the American Veterinary Medical Association. Oct 1, 1989. v.

7. Shelton, J.N. Embryo manipulation in research and animal

production.//Australian journal of biological sciences. 1988. v. 41 (1)

http://www.0ve.ru/botanika_i_selskoe_xoz-vo/transplantaciya_embrionov_krupnogo.html

Патологоанатомическое вскрытие.

Патологоанатомическое вскрытие применяют с целью определения причины гибели эмбрионов. Существуют две основные причины гибели эмбрионов при инкубации яиц, свободных от возбудителей инфекционных заболеваний: биологическая неполноценность инкубационных яиц и нарушение режима инкубации.

Техника вскрытия яиц с погибшими эмбрионами сходна с техникой вскрытия яиц с живыми эмбрионами. Однако в данном случае необходимо особенно тщательно соблюдать ветеринарные требования. Работать следует в резиновых перчатках.

Вскрыв яйцо и удалив оболочки, определяют положение эмбриона. Нормальным счита-ется такое положение, при котором тело эмбриона расположено вдоль длинной оси яйца, шея изогнута, голова находится под правым крылом, кончик клюва выступает из-под крыла и направлен в сторону воздушной камеры, ноги согнуты в суставах и прижаты к телу. После определения положения эмбриона пинцетом осторожно извлекают его из яйца и осматривают содержимое скорлупы. Оболочки скорлупы должны быть слегка розового цвета, без околоплодной жидкости и утолщений. Обращают внимание на отсутствие большого количества мочекислых солей, неиспользованного белка или переполненных кровью участков.

После этого осматривают сам эмбрион, отмечая общее его развитие, отсутствие отклонений на туловище, голове и ногах, состояние желточного мешка, отсутствие продуктов обмена. Затем эмбрион вскрывают, предварительно поместив его в чашку Петри, залитую воском, и закрепив его препаровальными иглами. Острыми кончиками ножниц делают разрез кожи по средней линии снизу живота по направлению к голове. Желточный мешок удаляют так, чтобы не повредить его оболочку и не запачкать брюшную полость. Кожу отворачивают, разрезают грудную полость и осматривают сначала сердце, разрезая левую правую его половины и отмечая наполнение его кровью, а затем лёгкие. Разрезают бронхи, трахею и гортань и определяют наличие в них содержимого, указывающего на заболевание аспаргелезом.

После этого осматривают печень, селезёнку, мышечный и железистый желудки, кишечник, почки, делают разрез их тканей, надрезают кожу вокруг головы и шеи, разрезают кости черепа, обнажают мозг. При этом обращают внимание на отсутствие кровоизлияний, гиперемии, анемичности и других отклонений в состоянии тканей внутренних органов. Делают заключение о причинах гибели эмбриона.

При вскрытии яиц с погибшими эмбрионами следует соблюдать меры предосторожности, поскольку в яйце с погибшим эмбрионом могут находиться патогенные микроорганизмы. Необходимо обратить внимание на недопустимость касания эмбриона руками, на правильное пользование инструментом и соответствующую дезинфекцию рук по окончании работы.

Основные признаки гибели эмбрионов в результате неполноценности инкубационных яиц.

Авитаминоз А. Эмбрион отстаёт в росте. Слабая пигментация пуха и ног, бледный желток. Повышенное отложение мочекислых солей на оболочках эмбриона. Если авитаминоз А сочетается с авитаминозом D или неполноценным протеиновым питанием птицы родительского стада, то наблюдается значительное отложение солей в почках, мочеточниках и других внутренних органах.

Авитаминоз D. Смертность эмбрионов наблюдается на 8–10-й день инкубации. Характерный признак сильного авитаминоза – отёчность кожи в области головы и шеи, туловища и ног. Почки мягкой консистенции, увеличены в объёме. Наблюдается перерождение печени.

Недостаток витаминов группы В. Эмбрионы погибают в большинстве случаев на 12–16-й день инкубации. Если эмбрион погиб на ранних стадиях инкубации, то у него нарушена дифференцировка зародышевых листков и оболочек. У эмбрионов старших возрастов не полностью использован белок. В полости аллантоиса откладывается большое количество мочекислых солей. На почках заметны кристаллы солей в виде беловатых отложений. Оперение недоразвито. Оно имеет « курчавый » вид. В некоторых случаях нижняя часть клюва недоразвита, а верхняя переразвита и изогнута книзу, образуя так называемый попугаевый клюв. Кожа в области головы и шеи отёчная. Голова большая, ноги укорочены, искривлены. При недостатке витамина В12 нарушены процессы кроветворения. Печень тёмно-красного цвета, дряблой консистенции. Пух и клюв приклеиваются к скорлупе, в результате чего вывод затрудняется и эмбрион погибает.

Белковая интоксикация. Многие из признаков недостаточности В характерны и для белковой интоксикации, которая возникает при даче птице родительского стада избыточного количества протеиновых кормов, особенно животного происхождения.

Авитаминоз Е. Значительное число эмбрионов погибает на 6–7-й день инкубации. Сосуды желточного мешка наполнены кровью, эритроциты бледные.

Недостаток марганца вызывает нарушения в развитии костяка и связок. Кости ног укорочены, суставы утолщены, сухожилия и связки недоразвиты. У выведенных цыплят наблюдается характерное заболевание – скользящий сустав, или перозис.

Старые яйца. В яйцах, хранившихся длительное время, происходит гибель эмбрионов на ранней стадии инкубации. Поэтому такие яйца ошибочно относят к неоплодотворён-ным. Одним из характерных признаков при этом является аморфоз. Зародыш имеет вид бесформенного сгустка тёмно-серого цвета, располагающегося на внутренней поверхнос-ти подскорлупных оболочек.

Основные признаки, характеризующие гибель эмбрионов в результате нарушения режима инкубации.

Перегрев яиц в зависимости от степени и продолжительности в разные периоды инкубации оказывает неодинаковое действие на развитие эмбрионов. Перегрев в первые дни инкубации увеличивает число погибших эмбрионов и приводит к появлению кровяных колец. У эмбрионов, продолжающих развиваться, наблюдаются всевозможные уродства головы: недоразвитие черепа, открытый головной мозг (акрония), недоразвитие глаз. При перегреве на 3–5-е сутки инкубации возникает незарастание брюшной полости. Внутренние органы остаются открытыми – эктопия. Перегрев в середине и в конце инкубации вызывает гиперемию оболочек и внутренних органов, кровоизлияния под кожу и во внутренние органы.

При длительном несильном перегреве ускоряется развитие эмбриона, аллантоис замыкается преждевременно, наклёв начинается рано, вывод растянут. У цыплят, погибших при выводе, наблюдается неправильное положение, невтянутый большой желточный мешок или неиспользованный белок.

Недогрев яиц. Если температура понижена, развитие эмбриона запаздывает. Желточный мешок имеет тёмно-зелёный цвет. Наблюдается отёчность кожи, особенно в области головы и шеи. Скорлупа после вывода сырая, с комками неиспользованного белка.

Избыточная влажность. При высокой влажности в яйце накапливается большое количество клейкой околоплодной жидкости. При наклёве молодняк заглатывает её и погибает. Перья и клюв приклеиваются к скорлупе, что затрудняет вывод. Кишечный тракт погибших эмбрионов переполнен жидкостью.

Недостаточная влажность. Если влажность воздуха низкая, то яйца сильно теряют массу. Недостаточная влажность усиливает действие высоких температур, и вызывает сходные отклонения в развитии эмбрионов. Во время вывода оболочки пересыхают и уплотняются, эмбрион не может освободиться от скорлупы.

Нарушения газообмена. Кислородная недостаточность, в середине инкубации вызывает переполнение кровью сосудов аллантоиса, резкую гиперемию желточного мешка и внутренних органов. При нарушении газообмена во второй половине инкубации наблюдается неправильное положение эмбрионов: голова, как правило, повёрнута в сторону острого конца яйца.

Неправильное поворачивание яиц приводит к слипанию белка с подскорлупными оболочками на остром конце яйца и ненормальному смыканию аллантоиса, при котором значительная часть белка остаётся за его пределами. В результате белок полностью не используется и нарушается питание эмбриона.

Гурген Грантович Симонян.

Добавить комментарий Отменить ответ

Мы в соц. сетях

Facebook

В Контакте

Copyright © 2012. Гурген Грантович Симонян. Все права защищены.

Основные признаки гибели эмбрионов